La première apparition de Roy Dupuis à la télévision remonte à la fin des années 1980 dans le téléroman L'Héritage. Puis, il a participé à la série L'Amour avec un grand A de Janette Bertrand avant de décrocher le rôle qui l'a fait connaître du grand public : Ovila Pronovost dans Les Filles de Caleb et Blanche.
En 1994, il participe au téléfilm Les Jumelles Dionne (Million Dollar Babies). À la même période, on peut le voir dans la série Scoop de Fabienne Larouche et Réjean Tremblay, puis, brièvement, dans Urgence. Un peu plus tard, il incarne le Rocket dans la série télévisée Maurice Richard : histoire d'un Canadien. Il joue ensuite dans la série d'espionnage canadienne-anglaise Nikita. On le voit ensuite dans la mini-série dramatique Le Dernier Chapitre, qui s'intéresse au monde des motards criminels. Après avoir passé sept ans loin des plateaux de télévision, il décroche un rôle principal dans la série Les Rescapés, aux côtés de Guylaine Tremblay, en 2009.
Il travaille ensuite sur le documentaire Une terre 1001 mondes, puis, six ans plus tard, il effectue un nouveau retour dans la série Toute la vie. On peut le voir chaque semaine dans le rôle du psychoéducateur Christophe L’Allier sur les ondes d'ICI Télé.
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